怎么检测狗狗免疫？
我们日常接触到的疫苗，都是灭活疫苗和减毒活疫 苗。其中灭活苗是使用病毒培养，获得大量病毒后，用福尔马林或甲醛等杀菌剂将其杀死，然后再接种到动物体内；而减毒活疫苗则是通过人工方式使病毒的感染力减弱而仍保持其感染能力的一种疫苗(类似于口服的肠病毒疫苗)，比如狂犬疫苗、犬六联苗等等。 既然要检验是否注射了疫苗，我们就得了解这些疫苗的成分，如果注射的疫苗里面没含有这些抗原（细菌或者病毒），那肯定是没用的！但遗憾的是，由于各种原因，目前国内外并没有统一的标准用于检测疫苗的有效性，所以不同的实验室可能结果不同甚至相差较大！不过幸运的是，大部分实验室还是能检测出较常见疫苗的成分的！ 目前，国际上比较通用的方法是PCR方法来检测疫苗接种后的抗体水平来判断是否免疫成功以及免疫效果如何 （1）将已稀释3倍的血清加入至含有2×dNTPS、50 mM MgCl2、10 mM Tris-HCL (pH8.3)， 4 U/μL RNase Inhibitor， 0.5 μg/μL BSA 的离心管中混匀。
（2）在4℃条件下孵育1h。 （3）向上述溶液中加入20uL of RNAse A，混匀后在37℃水浴下保温60min，然后立即冷却至冰上。
（4）向上述溶夜中加入10 uL of Proteinase K，混匀后在56℃水浴下保温90min。
（5）加500 uL酚氯仿混合液后颠倒数次混匀，然后于4℃下12，000 rpm离心10min，取上层水相。
（6）加1/10体积的3 M NaAC及2倍体积的无水乙醇，沉淀RNA，室温放置10 min使其凝结；4℃条件下12，000 rpm离心10min，收集沉淀；75%乙醇洗涤，真空干燥后溶于DEPC水中。
（7）将1~2µl的DNA样品进行琼脂糖凝胶电泳分析，确定DNA模板浓度，并将其稀释成4 ng/μL备用。
（8）将引物加入到4 ng/μL DNA溶液及10X PCR缓冲液、25 mM MgCl2、0.2 mM dNTPs、1U AmpliTaq® DNA polymerase混合液中，混匀后进行PCR扩增反应条件为：
循环数： 35 cycles 温度条件 ： 94°C预变性5 min; 94°C变性30 s，58°C退火30 s，72 °C延伸60 s；最后72°C延伸7 min。 所用引物如下： 检测结果判断：以PCR产物电泳图谱中的亮带面积与marker对应条带的面积之比作为衡量标准，判断该样本是否免疫成功，比例大于0.1视为有效免疫。